甲醛变性RNA琼脂糖凝胶电泳用什么染料染色?为什么我跑不出条带?
来源:学生作业帮 编辑:灵鹊做题网作业帮 分类:数学作业 时间:2024/04/28 16:26:11
甲醛变性RNA琼脂糖凝胶电泳用什么染料染色?为什么我跑不出条带?
我做甲醛变性RNA电泳时没有条带,是没有染上色吗?我用的是Green View加到胶里来染色.同样的RNA样品,做普通的非变形的RNA电泳有条带且基本没有降解.第一次做变形RNA电泳,我的操作过程基本参照分子克隆实验指南,除了没有用EB染色而是用了greenview.
我做甲醛变性RNA电泳时没有条带,是没有染上色吗?我用的是Green View加到胶里来染色.同样的RNA样品,做普通的非变形的RNA电泳有条带且基本没有降解.第一次做变形RNA电泳,我的操作过程基本参照分子克隆实验指南,除了没有用EB染色而是用了greenview.
greenview没用过,只用过EB.
我不在甲醛胶里加EB,好像那样背景比较高.我都是在变性RNA时在RNA loading buffer里加EB,胶上没什么背景.你先试一下看看吧.
再问: 请问用EB染色时,RNA每个泳道的上样量需要多少?大概每个泳道上点多少的RNA跑出来的胶效果最好?
再答: 通常每个泳道10微克,有时也用5微克。RNA少时条带会淡一些,我觉得10微克好。
样品缓冲液中的EB不要太多,有一点就行,不然背景会高,你摸索一下吧。
我不在甲醛胶里加EB,好像那样背景比较高.我都是在变性RNA时在RNA loading buffer里加EB,胶上没什么背景.你先试一下看看吧.
再问: 请问用EB染色时,RNA每个泳道的上样量需要多少?大概每个泳道上点多少的RNA跑出来的胶效果最好?
再答: 通常每个泳道10微克,有时也用5微克。RNA少时条带会淡一些,我觉得10微克好。
样品缓冲液中的EB不要太多,有一点就行,不然背景会高,你摸索一下吧。
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