求推荐克隆载体和表达载体

来源：学生作业帮编辑：灵鹊做题网作业帮分类：综合作业时间：2024/05/09 09:24:37

求推荐克隆载体和表达载体
本人有一水稻与抗旱相关的目的基因的mRNA完整序列,想将其编码框转到拟南芥中表达,看看该基因能否提高拟南芥的抗旱能力,求教各位大神推荐下克隆载体和表达载体.另外表达载体上需不需要有强启动子（比如35S）?我只看基因转进去有没有提高拟南芥的抗旱性.本来打算用pCAMBIA系列做表达载体的.

可以这样做：
根据目的序列设计引物,5' 引物、3' 引物加酶切位点,PCR产物连接pGEM-T Easy载体,构建目的基因克隆载体.pGEM-T Easy不知现在还有没有卖的,有点贵,但成功率很高.
分别对pCAMBIA 1301和pBI 121双酶切,将pBI 121 gusA编码序列连同CaMV35S启动子和nos终止子片段反向插入pCAMBIA 1301多克隆位点,构建带有GUS载体.
选适当的酶酶切自己构建的带有GUS的载体和目的基因CDS,构建中间载体,将中间载体CaMV35S启动子- 目的基因CDS-nos终止子插入片段进行测序验证,这个35S启动子来自pBI 121,目的基因CDS替换了来自pBI 121中的gusA编码序列.至此,构建的双元载体中共有3个CaMV35S启动子,分别启动pCAMBIA 1301中gusA、hpt II和插入的目的基因CDS.
然后转根癌农杆菌感受态细胞,拟南芥蘸花转化,用潮霉素筛选,高的是转化植株,GUS染色确认,后续抗旱性验证.
我想这个过程包含了你提到的几个问题,酶的选择根据目的基因序列,用软件分析一下来确定.这是个真实的实验,希望能提供参考.

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