怎样检验载体是否进入受体细胞?老师讲的是标记基因,具体步骤是什么?

来源：学生作业帮编辑：灵鹊做题网作业帮分类：生物作业时间：2024/06/04 23:22:23

在原核克隆过程中：
最常用的是抗性筛选：载体上具有某种或某几种抗生素抗性基因,转化之后涂布在含有该抗生素的平板上,能长的就是载体进入了的细胞.挑选之后可以再利用菌落PCR或者扩增之后酶切,以鉴定目的基因是否也重组进去了,以排除载体自连的空载.最后用测序的方法检测是否有突变产生.
还有蓝白班筛选：目的基因重组的位置位于载体LacZ基因中间,加入目的基因插入成功,并转入受体细胞,那在平板上,转化成功的菌落就不会表达LacZ基因,底物就不会被分解成蓝色,白色的菌落就是潜在的阳性克隆,另可加抗性筛选,PCR,酶切,测序进行最终确定.
另外就是一些蛋白标记,比如荧光蛋白,荧光素酶基因等,可通过观察得到阳性克隆.
在真核克隆过程中：
除了可采用荧光蛋白等之外,还可以通过检测你所需要的产物是否有表达来检测,比如通过ELISA,WesternBlot的方法检测目标蛋白.同样也可配合抗性筛选.
再问：简单地说，怎样就说明载体进入了，怎样就说明没进入？
再答：能检测到载体上相应的标记基因，就进入了，没有就没有进入！

怎样检验载体是否进入受体细胞?老师讲的是标记基因,具体步骤是什么? 表达载体上的标记基因是怎样检测目的基因进入受体中的标记基因是怎样鉴别受体细胞中是否有目的基因病毒作为载体是如何携带目的基因进入受体细胞? 书上说“标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因” 但有可能标记基因随质粒一起导入受体细胞,目的基因和质粒结合不成 1 书上说标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因从而将含有目的基因的细胞筛选出来教材中说“标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因”,而我们检测受体细胞中是否含有目的基因的方法是DNA分子杂检测受体细胞中是否含有目的基因是用DNA分子杂交技术还是检测受体细胞是否含有标记基因基因工程的受体细胞中没有标记基因,是指没有这种基因,还是没有质粒? 如果导入的是质粒而非重组质粒,那么受体细胞中都含有标记基因,那怎样筛选出带目的基因的细胞生物选修3……标记基因,书上说作用是为了鉴定受体一般是否含有目的基因；在目的基因导入受体细胞后还要用目的基因导入受体细胞是怎样进行的?如何防止目的基因与质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接?请