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反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,这是为什么呢?

来源:学生作业帮 编辑:灵鹊做题网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/04/30 00:06:34
反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,这是为什么呢?
Oligo(dT)反转录,目的片段2700bp,引物二聚体小于100bp
反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,这是为什么呢?
反转录失败或者RNA质量不好
再问: 有没有可能是引物的设计不好?(引物二聚体的范围是在100bp左右)如果是cDNA反转录不好,该如何检测呢?谢谢
再答: 有可能是引物的问题;在P目的基因的时候,建议你同时P个actin,如果actin有,而目的基因没有则很可能就是引物问题或退火温度有待于摸索;如果连actin都没P出来,则可能是反转录的问题或是RNA质量不好
再问: 你好,谢谢……我也想过这样做,但是我做的是鸭子的,鸭子的actin也只有150左右,无法分辨引物二聚体和actin,我想请问你一下,有没有大一些的管家基因,如何找到鸭子上其他的管家基因……
再答: 这样的话, 你只能从相关文献上找了,看看其它文献上都用的哪些管家基因。我没做过鸭子,所以帮不上忙了