灵鹊做题网关于原核表达基因测序问题
来源：学生作业帮 编辑：灵鹊做题网作业帮 分类：综合作业 时间：2024/04/28 06:32:51
关于原核表达基因测序问题
原核表达基因克隆时,为什么非要先克隆到中间载体上测序,而不是直接到表达载体,拿表达载体测序呢?希望大侠们不吝赐教啊!
原核表达基因克隆时,为什么非要先克隆到中间载体上测序,而不是直接到表达载体,拿表达载体测序呢?希望大侠们不吝赐教啊!
其实简单一点,可以直接克隆到表达载体上,送去测序确定之后再表达；我们以前一直这么做的；但是有些情况下,比如表达载体不是诱导型的,或者表达的蛋白对大肠杆菌宿主菌毒性很大,影响菌的生长,导致菌生长困难、提质粒困难等等,就会先克隆到一个克隆载体上面,做测序确定；然后再克隆到表达载体上.
通常来说我不太喜欢做两次克隆,总是酶切转化筛选；我喜欢选控制比较严谨的可调控性原核表达载体,比如pET系列的多个载体,直接把目的基因克隆上去.
通常来说我不太喜欢做两次克隆,总是酶切转化筛选；我喜欢选控制比较严谨的可调控性原核表达载体,比如pET系列的多个载体,直接把目的基因克隆上去.