要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少?

来源：学生作业帮编辑：灵鹊做题网作业帮分类：生物作业时间：2024/05/01 12:38:46

因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul反应体系中,最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全酶切的酶量.所以,一般在酶切体系里,DNA的量是可以加到非常大的.因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题,所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些.这样你纯化回收后的DNA剩下的就比较多,有利于后期的连接以及筛选.具体的话,我经常做的就是50ul体系中除了buffer和酶以外,其他的成份全部都是载体或者插入片段的溶液.当然,你得保证你的DNA浓度约可以达到50ng/ul左右的浓度.最后,做连接的时候一定要注意插入片段和载体的摩尔比,理想状态下应该是3-10比1.
再问：要是知道了载体和插入片段的浓度怎么计算摩尔比？希望详细点，最好可以举个例子。还有就是怎么根据跑的电泳的结果来判断载体和插入DNA的浓度？非常感谢，因为第一次做，什么都不懂，教授逼得还比较紧，麻烦您了！！
再答：简单来说，分子量越大，同样质量浓度的DNA摩尔浓度越小，因为都是DNA分子，所以这只是一个非常简单的比例换算问题了。举个例子来说，假设载体与插入片段浓度一致，载体是10kb，插入片段是1kb，要达到载体比插入片段的摩尔比为10比1的时候，那么你加入的载体和插入片段体积就应该是1比1。另外关于DNA浓度，你可以看下你的marker说明上是否有标明条带的DNA浓度，如果有，那么根据电泳的条带亮度与marker亮度对比去估计DNA浓度，如果没有的话，用分光光度计去测A260nm的OD值。如果测量OD值的话，你只要得到插入片段和载体的OD值比例关系就行了，因为具体计算的时候考虑的也只是比例而不是实际浓度。当然，你至少得保证，你的载体片段和插入片段进行电泳的时候，能够看到清晰的条带。

要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少? 95%的纯来苏水要配置成5%的消毒液怎么配,取多少来苏水,加多少清水? 华东师范大学出版社的稍微详细一点要多少加多少配置稀盐酸浓度为36的浓盐酸配置成3%的稀盐酸500ML 应该加多少水和多少盐酸弄硫酸配置为4%的稀硫酸500ML应 36%的盐酸配置1mol/L的盐酸要加多少ml到500ML容量稀释有40%的甲醛500ml,要配置成10%的甲醛需要加多少毫升水配置500克含氯化钠质量分数0.9%的生理盐水,要称多少克食盐,量多少ml的水? 目的基因通过载体进入到受体细胞后,和载体一起复制共存,还是插入到细胞内的DNA上了? 琼脂糖凝胶电泳DNA最少要加多少将DNA插入人体细胞基因组中适合的载体是反转录病毒,为啥? 载体DNA必须有一个或多个限制酶的切割位点,以使目的基因可以插入到载体上去.“这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置有95%的乙醇500ML要配置成70%的乙醇要加多少灭菌馏水?答案是178 怎么算的啊