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羊水想最后提取DNA的 但想先做到保存细胞这一步,该如何处理 及保存

来源：学生作业帮 编辑：灵鹊做题网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/02 15:29:07
羊水想最后提取DNA的 但想先做到保存细胞这一步,该如何处理 及保存
羊水想最后提取DNA的 但想先做到保存细胞这一步,该如何处理 及保存
凡正规的羊水细胞培养及组织培养实验室,均应有冰冻细胞及保存细胞的设备.如发现染色体异常之细胞,应该传代后冰冻保存,以备必要时复核核型及研究染色体基固定位等应用.
实验室应该有液氮罐装置,并定期补充液氮.液氮罐内口四壁有凹槽,可挂5～6个长钩架,架子上安放一层层的硬纸盒或铁盒,每盒墔有孔架,可安放10～15个盛冰冻细胞的管子.除液氮罐外,还应该有冰冻细胞的仪器,如无此条件也可改用低温冰箱冰冻.
冰冻方法：
（1）检查培养的T-75培养瓶,如瓶底的细胞生长已经很旺盛密集,即可冻藏吸出培养液,加入2ml蛋白酶,当瓶底细胞已经松解时,用弯头长吸管轻轻吹打,吸出脱落之细胞,放入15ml的离心管内,用13ml Hank氏缓冲液洗培养瓶,液体也倒入离心管,离心5～8分钟,转速1 000/分,吸出上清液,管底留1～2ml,用手指尖轻拍管底,或用长尖吸管打开细胞块,再用Hank氏缓冲液洗一次,吸去上清液.沉淀之细胞块备用.
（2）在消化的同时配制冰冻液,用培养液MEM或Ham F10,内加10%二甲基亚枫,共配20ml左右,用微孔滤器过滤后,置冰箱内备用.
（3）准备好冰冻细胞用的小试管6个,每管可容2.5ml,上有盖,将此6个小试管放在冰浴内.
（4）在盛有细胞之离心管壁7.2ml处,作一标记（如以一瓶细胞分成6个小管冰冻,每管内应有1.2ml冰冻液计算,则应该用7.2ml冰冻液）,放入1.5ml配好的冰冻液,打匀细胞团成细胞悬液,加冰冻液至7.2ml标记处.
（5）在盛冰冻细胞之小管壁上1.2处作一标记,立即将已加冰冻液之细胞悬液分盛于6个小管内,盖好盖子,放入冰浴内.
（6）取出小试管放入冰冻仪器内冰冻.
（7）冰冻：如用冰冻仪冰冻,可按照仪器使用说明；如无冰冻仪,可将上述小试管置试管架上,用软纸包裹数层放入一绝缘盒内,放入一70℃低温冰箱15～18小时,取出置液氮罐内保存.使用时取出一小管,洗去二甲基亚枫,放入T-25培养瓶,培养3～5天即可行满瓶细胞.
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