绝对定量阴性对照CT值大于35,但是溶解曲线有峰

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?再问：不知道，我是个新手什么都不懂再答：那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来

我不太清楚,你所谓的微生物限度是什么,但是所谓阳性对照就是你的实验系统正常工作时所应该产生的阳性反应的样子.阴性对照亦然

阈值和基线的设置肯定会影响Ct值,你可以采用每次反应完后软件自己选定的阈值.你也可以手动调整,但是如果你是相同的模板,做不同反应,那你必须使两次实验的阈值和基线调到相同.使用相同的标准品,才能减小不同

阳性对照是用来检验你的实验操作有没有问题,阴性对照是用来检验你的实验材料有没有问题,所以PCR中阳性对照是要加入你要P的基因,跟引物配对,是一定能P出条带的,而阴性对照就是加入空载体,是不能P出条带的

理论上是越一致越好.如果有很大的差异,说明实验有较大的误差,或者样本有降解.

通常情况下,我们认定为15到35CT比较合理,超过35个CT那么就算它没有扩增了,如果15之前起峰,那么就是模板浓度太高所引起的,如果发文章,那么建议你控制在15到35之间吧

仪器配套软件会直接给出来一个CT值,也可自己调节

阴性对照是为了消除假阳性,阳性对照是为了消除假阴性.可以理解为阴性就是无,阳性就是有,那么如果不加阴性对照得到的结果就有可能是假的,这时候叫假阳性.相反,阳性对照也是这个道理.

请问你做RealTimePCR做几个循环的?40个吗?40个循环的话,CT值在30左右很正常的啊,CT值30的话大概是10000copies,说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛

没有关系,可以继续按正常步骤计算.内参的CT值通常要控制在25-30,目的基因CT值高,只说明目的基因表达量比较低..没关系..

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加样误差,或者浓度本来就低再看下你设置的基线是否不对再问：都是先配好mix液，混匀后再分加至每个孔的，应该误差不会很大吧（出现Ct值的大多在20左右）再答：有没有看看扩增曲线是否正常？或者你的模板质量

你一次实验做的数据,内参可以得到几个CT值,目的基因也会得到几个.这样的话,根据平均的CT值,就会得到一个倍数（相对量）.实验肯定不会只做一次吧,至少重复3次以上.这样就会得到3个以上的倍数了.3个以

△△Ct=△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)△Ct(试验样品)=Ct（试验样品,目的基因）—Ct（试验样品,内参基因）△Ct(基准样品)=Ct（基准样品,目的基因）—Ct（基准样品,内参基因）2－

不需要完全符合等差数列的.你说说看相关系数R2和扩增效率E的结果怎么样,之后再考虑调整体系和qPCR程序.

看了你空间里的溶解曲线,你可以看到溶解峰的温度都很低,全在80以下,你扩出来的东西多半只是引物,你跑定量的时候有做NTC的孔吗,如果有做,可以对照NTC组和加了模板的组,溶解峰还是一样的话,那你扩出来

主要看你的CT值大约是多少,如果很大（大于40循环）那么可以判定结果没有问题,如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染.另外你阴性对照加的是水

空白对照组：不加任何物质,反应显色为试剂本身.阴性对照组：加入阴性血清（物质）反应显色为阴性颜色.阳性对照组：加入阳性血清（物质）反应显色为阳性颜色.试验中加入这三组对照.一是用于判断检测结果,而是用

博凌科为-为你1.反应循环数不够.一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环（如至45cycles）,但高于45个循环会增加过多的背景信号.2.检测荧光信号的步骤有误.一般SG法采用72℃延伸时

△Ct（n）=Ct目的基因（n）-Ct内参基因（n）；△△CT（n）=△Ct（n）-△Ct（1）；然后算出2-△△CT；标准差我是同一处理做了3个平行算出来的.没法下标,用括号处理,