组氨酸标签的融合蛋白可以注射小鼠吗-搜答案-灵鹊做题网

组氨酸标签是原核表达载体上6个组氨酸的区段,这个标签在PH8.0时不带电,且无免疫原性,对蛋白质的分泌,折叠,功能基本上无影响.能高度亲和镍离子,用于蛋白质的亲和纯化.

可以,我做过的,很可靠,关键是你的GFP要正确表达,抗体要有效检测到的目的蛋白比不融合时大大约25KD左右

请给出相关的参考书籍!用GST标签把X蛋白结合到层析柱上,血清用这个柱子亲和层析.

这个

ArecombinantproteincanbetaggedN-terminallyorC-ternimallywitha6XHistag.Thistagisbetterinprokaryoticsy

GST标签太大了,HIS小,但是估计没GST好纯化,我用的是HIS标签,结果,总有两个杂蛋白去不掉,挺郁闷,上AKATA效果也不怎么好如果多个大个的GST不影响你蛋白活性的话,那GST吧.

看你的flag抗体是否有问题,我是做抗体生产的,原来开发flag抗体时就会对其进行C端、N端、M端的Qc检测,正常情况下三端都需要有识别,我担心你的抗flag抗体有可能不识别N端,还有一种可能就是你的

用GST标签把X蛋白结合到层析柱上,血清用这个柱子亲和层析.

当然有可能会了,GFP不是在C端就是在N端,连接好后,先放在一般质粒载体上去表达,看看此蛋白还具不具备应有的功能,这是必须要做的步骤,验证功能的办法很多,比如免疫共沉淀,信号转导功能,膜定位或核定位等

用融合蛋白的tag做WesternBlotting,或者纯化后看融合蛋白的大小和预计的比较

优点：可以方便检测及分离纯化；缺点：可能影响到原蛋白的结构而破坏它天然的功能,或赋予其新的功能.具体的要看你和什么标签融合.

为什么6X组氨酸与ATG中间有14个碱基?不是3的倍数?悲剧了.再问：是表达不会有his标签还是肯本就不能表达？再答：标签应该能表达出来，不过后面的序列全乱了，移码了，肯定不能用了

组氨酸是具有杂环的氨基酸,每个组氨基酸含有一个咪唑基团,这个化学结构带有很多额外电子,对于带正电的化学物质有静电引力,亲和层析是利用这个原理来进行吸附的,亲和配体（也就是填料）上的阳离子（一般是镍离子

你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸标签的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂蛋白,也可能目的蛋白部分降解.要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到.可能试试再加一

是这样的,his标签蛋白就是：六个组氨酸.一般存在于重组蛋白前面或后面,便于纯化该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的目的.也就是在表达载体上

不一定必须加组氨酸标签!你也可以加其他标签,比如：GST等.也可以不加标签,不过要清楚蛋白的性质,比如等电点,根据等电点就可以用离子交换柱进行纯化!

因为,纯化过程包括对大肠杆菌的裂解和对目标蛋白的纯化,经纯化后,大部分的杂质（杂蛋白、糖和核酸）都去除了,对ELISA的干扰小.如果不纯化,大肠杆菌本身是有众多生物分子的,这都是潜在的干扰性抗原.

你的蛋白表达的是可溶还是包涵体?再问：都有，用上清纯的，纯不出来，可能的原因是什么？

做个对比实验用不加不加目的蛋白多角体蛋白做个指纹然后一差减得到的就是目的蛋白的指纹