流式测转染细胞-搜答案-灵鹊做题网

不知道你没杂出条带是因为什么原因,还有你杂交的抗体是目的蛋白的抗体吗?你杂杂标签蛋白试试,看看有没有条带啊?我这么说是因为,膜蛋白确实不好提取,而且提取后可能空间构想改变了,你的抗体可能识别不了了,而

转染成功一般都会表达GFP蛋白,这个蛋白在流式上面可以用FL1通道检测到.转染成功的有表达,不成功的没表达,很容易算出细胞转染率.

我有个室友前段时间也遇到了这种情况再答：后面找重庆威斯腾生物公司做的慢病毒，慢病毒感染后细胞死亡率低多了，效果还可以。

跟一般的片段插进质粒构建一样啊只是过表达的话扩增出来的片段必须包含该基因完整的CDS序列然后插入位点要在质粒的promoter后面序列不能有突变转染也和别的一样用Lipo啥的

应该还有优化的潜力的,我不知道你用的什么转染试剂.转染效率本身和你用的转染试剂有很大的关系,建议你先找来集中不同的转染试剂,用VenusC1或者是VenusN1作报告质粒,找到最适合你的细胞的试剂,然

许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点,可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制,从而提高外源基因的表达水平.293T细胞就是一种表达SV40病毒T抗原的细胞系,它来源于

这个问题其实不难,但是你如果样本多的话,那还是建议找外包公司做吧,重庆威斯腾生物负责整体实验外包,做了10多年了,口碑很不错.

稳转吧?顺转不用切再问：酶切后纯化时能用普通胶回收试剂盒吗再答：单切回收其实不用跑胶有一种pcr产物回收或者dna片段回收试剂盒就行不知道胶回收试剂盒能不能不跑胶直接用

这个实验可以找威斯腾做,我以前也是在那里做的,效果很好.

任何东西都可以复制

电转染、lipofectin都可以再问：你好，请问你做过悬浮细胞转染吗？我买了一个罗氏的X-tremeGENEHP转染试剂，据说细胞毒性较小，还没开始转，但我知道悬浮细胞不好转，请问有没有应该注意的细

跟质粒一样啊用lipo什么的脂质体转就行了一般转染试剂的说明书上都会说的

没有荧光标记,还有其他的标记么有抗性的话,可以用抗生素筛一下.还可以做westernblot,或者荧光定量PCR的检测,看看目的基因转进去了没再问：1.抗性是质粒的抗性吗？我的质粒是卡那抗性的2.做W

显微注射法.基因枪法.

用罗氏的HP试一试

动物细胞中的高营养需求的培养,通常需要多种氨基酸,维生素,辅酶,核酸,嘌呤,嘧啶,激素和生长因子,其中许多成分行血清,胚胎浸出液来提供,在许多情况下,需要10％胎牛血清或新生小牛.血清是一个很好的营养

提高转染效率要注意的细节太多太多了,选择合适的试剂并正确使用是转染成功的基础详见：

提高转染效率要注意的细节太多太多了,选择合适的试剂并正确使用是转染成功的基础.具体说一下转染的细胞吧

转染的质粒带有标记基因,比如EGFP.分析绿色细胞的比例就得到了转染效率了.

每个孔种10万细胞就差不多了吧.