构建质粒时目的基因的正向插入与反向插入

第一个办法,如果你有这个载体的通用引物,可以用这俩通用引物做PCR,然后电泳观察条带的大小,如果条带和你的mRNA的大小相近（应该是略大于mRNA的,因为带有了小部分的载体序列）,那就说明这里边是插入

没有严格的界限的,从100bp--5000bp都可以使用一般的载体的.太长的使用一般载体的话就不太好连了.按现在研究的微生物目的基因很少有超过5000的.植物基因一般比较长,一般都是构建自己的启动子和

质粒是一个闭合的DNA圆圈,你得先切开它,把它切成一条线；然后你再从一长串DNA上切下你要的目的片段,用连接酶像胶水一样,吧质粒的两端和目的片段的两端连接起来——又成一个圆圈了,但是这次这个DNA圆圈

一般有两种方法,一是用目的基因的特异性引物以重组质粒为模板,进行PCR扩增.看能否出现目的基因的扩增产物.还有一种是将纯化的质粒进行酶切,因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点,只

构建一个新的基因表达载体,通常采用PCR将目的基因调出来.设计引物时从基因的CDS区开始（+1）为上游引物,下游为终止密码子止,再将目的基因转载到载体的MCS区

正如你所言,如果没有插入目的基因,只是载体导入同样能抗青霉素.问题的关键在于我们做实验时是吧质粒和目的基因动用限制酶剪切了,再用连接酶连接,其结果是有载体自连接的（只有载体）有重组的；有目的基因自连的

我看是要用氨苄霉素进行筛选.楼主说的两点都对,所以因为第2点所说的原因,用四环素肯定会杀死你想要的细胞滴.至于第一点所担心的纯度问题,当然也是可能有某些细胞带有空质粒啦.这只能够靠前期插入（ligat

你的质粒提出来以后没有经过线性化,因此存在三种形态,超螺旋,单链开环和线性分子,其中只有线性分子可以用maker判断分子量大小,另外两种不行,如果你的质粒提的质量好的话,应该是超螺旋占优势,超螺旋会比

重组时选择你的目的基因上没有,而质粒的多克隆位点上有的酶切位点,一般重组质粒需要两个酶,所以你要选择两个酶切位点,注意尽量避免使用切出平末端的酶.重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在

如果是双酶切,而且两个酶切位点不能形成自连,那么插入目的基因也只能获得一种重组质粒.如果是单酶切,或者双酶切的两个酶切位点是同尾酶,那么插入目的基因能获得两种重组质粒.

构建之后,这三种情况都是存在的,然后先把这所有的全部导入细胞（当然不是同一个细胞）,在质粒上会有某种抗性基因,就加入这种抗性基因（比如它抗某种抗生素,就加入这种抗生素,含目的基因—目的基因的这种重组片

限制酶连接酶作用于磷酸二子键

细菌表达载体如PET系列,载体有自身的启动子和终止子,只要把你片段从ATG后面到TAA加进去就行了.如果不要C段tag,就带TAA,如果要C段tag,就去掉TAA

原理是这样的：　　质粒上有四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因,如果将这样的质粒导入受体细胞中,则受体细胞既能在有四环素的培养基上生长,也能在含有氨苄青霉素的培养基上生长；　　将目的基因插入到四环素抗性

重组体

southern是检测你的目的基因是否转入受体即你的转基因植物中,在插入了目的基因的表达载体中应该可以检出你的目的基因,但这并不意味着你的目的基因就一定会成功的转入植物中.不知你转的是什么植物,如果你

启动子是转录,起始密码子是翻译,两者有什么关联么?换而言之转录了之后翻译开始核糖体还是只认最近的这个AUG去结合的啊,再问：谢谢！主要是我没有明确启动子的具体长度，扩增的启动子片段是包含了ATG后的一

选择合适的表达质粒如pET系列,再选择合适的两个酶切位点,先从T载体上切下基因,与酶切好的表达质粒相连,就好了

跑胶看大小啊,如果是转到了细菌中,就用目的基因的引物做PCR,能P出来的就是

什么基因?什么质粒?正常情况不用这样做的一般做表达用的基因片段是需要测序鉴定的连T载体就是为了去测序,证实你扩增片段没有突变且是你需要的目的片段然后再去连接你的目的载体就ok了