我想在PCR产物上加一个酶切位点,请问正向引物和反向引物酶切位点系列一样吗?-搜答案-灵鹊做题网

按理来说是不影响的,因为loadingbuffer里面主要是染料和比水重的成分,这样方便跑胶.你要是不放心的话就把产物都跑胶了,然后利用胶回收试剂盒来做.

首先你要有你目的产物和测序的DNA序列在网页最下端第二行有AligntwosequencesusingBLAST(bl2seq),点击进入看到有Sequence1和Sequence2,这里面分别输入你

你这是mRNA序列还是cDNA序列啊?你目的是什么?引物你设计在什么位置,你还是说清楚点吧!再问：要做的是基因的表达，这个基因是从NCBI上直接查询得到的。http://www.ncbi.nlm.ni

PCR的退火温度是引物与模板之间的,而realtimePCR最后的退火温度是产物之间的

是分别和两条链配对的序列.你可以在纸上画一下,第一次扩增时假设可以从引物向另一端无限延伸,那第二个循环时以一端是上游引物片段的序列为模板,从另一端的下游引物延伸过来,延伸到和上游引物第一个碱基处就终止

使用标准浓度内参.

当然可以的.

你的没个样品都应该有个内参基因来对照.这样才有意义

酶切位点多数时候是反向回文结构,因此你看到的正向序列与反向互补序列是相同的,所以在两个方向的引物上看,酶切位点序列完全一样.

能说一下你这样酶切的目的么?40bp和36bp的条带,只相差4个bp,基本上在琼脂糖胶上就不用考虑分清楚了.最好使用聚丙烯酰胺凝胶,很多用变性聚丙烯酰胺凝胶,可以分离到碱基数相差很少的条带,而某些变性

恩,原始的方法是PCR产物与变性缓冲液混合,95或98度变性5到10分钟.变性缓冲液中含有甲酰胺,是一种变性剂.后来出现了核酸外切酶,PCR产物酶切成单链再跑,变性不变性效果可能一样的,不过酶有点贵.

不用加.如果自己混PCR的各种料,就要加.

1一般不需要,你可以比对你用的高保真酶的buffer和Taq酶的buffer,要加也只能加差异的部分,如果直接加buffer里面离子浓度肯定都不对了；2都可以,不过我觉得还是应该在充分延伸后暂停或重新

原理：是来至于双脱氧链终止法——现在应用最多的核酸测序技术,由Sanger等1977年提出：模板经过测序PCR反应后形成3'末端带有荧光标记（早期用同位素标记）的相差一个碱基的不同长度的产物,再根据每

我也不是什么专家,只是做论文的时候研究过一段时间.我不太明白你的问题,不是cDNA,怎么能用RACE呢,RACE不是cDNA末端快速扩增技术(rapidamplificationofcDNAends,

对PCR产物进行变性时加的染液应该就是变性缓冲液吧,应该买试剂盒里面会有.在94度上放置5分钟后迅速放在冰上防止DNA复性就是了.再问：你好，还在吗，在94度进行变性5min，这个过程和PCR循环是没

不能,LoadingBuffer里有溴酚蓝,可终止有关酶促反应,特别是限制酶切反应,只能在点样是加入LoadingBuffer,观察电泳的进度.

DMSO可以提高PCR的特异性,帮助扩增一些难扩的模板.但要摸索,量大的话会抑制扩增,而且最好用于扩增1KB以上模板.

不建议这么做,pcr产物的话大部分的都会降解的,我有一次把pcr产物放在-20度里四天都有降解的情况.建议跑胶回收纯化后保存.

你需要保存多久?我最多放过两三天,没问题再问：我周三晚上扩增出来的，结果给忘记放冰箱了，刚刚才放进去，后边要做DGGE，还可以用么？再答：不好意思DGGE实验我没有操作过。但是从理论上来说，2天不会降