大肠杆菌质粒dna的转化假阳性检测

最大的问题应该是：大肠杆菌是原核生物,动物基因是真核基因,直接用限制酶切获得的基因在大肠杆菌内表达会错误,应该选择动物的相应基因的mRNA反转录得到DNA,或者根据相应蛋白质的氨基酸排列顺序推测DNA

一般程序如下：获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测.[主要试剂主要试剂]主要试剂1、LB培养基.2

利用PCR扩增基因,经测序正确后,酶切连接到质粒,转化大肠杆菌筛选阳性克隆,鉴定正确后诱导表达,通常是用IPTG诱导

用大肠杆菌表达载体就行啊!问题就是,ORF要正确,表达的蛋白可能被降解,激素基因要把内含子去掉,启动子、终止子都要用大肠杆菌的等等.

质粒

不一定.解析：作为目的基因运载体的一种,质粒被广泛适用于各种人为基因重组,其中大肠杆菌中的质粒以及农杆菌的Ti质粒最为广泛应用于转基因牛,抗虫棉,转基因羊等等家畜及农作物.再问：宿主细胞不会对导入的质

AC、人的胰岛素基因与大肠杆菌的质粒DNA分子重组不涉及减数分裂过程，基因自由组合定律和基因分离定律发生在减数分裂过程中，AC错误；B、DNA的复制具有半保留复制的原则，而人的胰岛素基因与大肠杆菌的质

LB培养基胰蛋白胨(Tryptone)10g/L　　酵母提取物(Yeastextract)5g/L　　氯化钠(NaCl)10g/L琼脂粉15g/L作用：养细菌抗生素,Amp+Kan+什么的作用：做筛选

因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物,加入抗生素会把细胞杀死.不过青霉素是个例外,因为青霉素只是阻止细菌细胞壁的合成,而不是直接杀死细胞,所以它只是抑制增殖,细胞还可以存活,然后表达抗青霉素基因,

就是利用基因工程首先提取目的基因从细胞的信使RNA中提取出P53基因构建基因表达载体将目的基因P53和载体-大肠杆菌质粒重组将目的基因导入受体细胞可以选择大肠杆菌或动植物细胞作为受体细胞,导入重组DN

首先看你是否使用蓝白斑筛选,如果使用了白色菌落就行了,但是x-gal比较贵,所以很多实验室都不用,而用菌落PCR.首先配制clonebuffer,每400微升含EXtaqbuffer40微升,Mgcl

目的基因是利用重组质粒导入的,但大肠杆菌不一定会将它整合到自身基因中,目的基因有可能会丢失.所以质粒上需要含有标记基因,用标记基因来判断质粒有没有被整合,侧面反映目的基因有没有被整合.

据我自己的经验,这种情况往往是由于操作不当引起,可能有如下原因：1,菌体量可能过大,裂解不充分,或裂解液与中和液比例不适当；（调整菌液量或缓冲液量）2,混合时过于剧烈,可能会带来基因组DNA片段的污染

大肠杆菌的基因组包括两个部分：大肠杆菌染色体DNA基因组+质粒DNA基因组还不懂,就跟我聊天是菌体的一种命名方式,这个东西不用管它

大肠杆菌的天然质粒有ColE1、RSF2124、pSC101.第一个质粒有大肠杆菌素E1合成基因；第二个是第一个的派生质粒,带有一个编码氨苄青霉素抗性基因的转位子；第三个有四环素抗性基因（手机字母不好

顺序是：2.解链蛋白--解开DNA双链1.DNA聚合酶三（大肠杆菌的DNA聚合酶一仅起辅助作用）5.DNA连接酶参加--复制形成的片段,特别是冈崎片段,需要连接酶连接.

基因组DNA可以提取,质粒DNA也可以提取,要看你需要的目的基因是位于基因组上还是质粒上,要哪个部分就提取哪个部分.在基因工程中,质粒是一个非常理想的载体,大部分的目的基因会先导入到质粒中进行扩增,所

高考不考,不需要理解.另：这个问题,我曾经也百度过.他们没有也具体交代,所以说,这是这种质粒所具有的功能而已,.再问：噢谢谢你

影响转化效率的因素很多,主要有：感受态细胞制备的质量、受体菌生长期（大肠杆菌在对数生长期易产生感受态）、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间（延长冰浴时间可略微提高转化率）

是F是吧～就是决定它们能不能发生接合～能结合就是能发生质粒基因的转移~