灵鹊做题网大肠杆菌表达β-actin
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/28 21:29:12
首先得到猪蛋白的基因（提取或者合成）,然后将这段基因连接到克隆质粒上,筛选阳性克隆,测序正确后,再将这段基因连接到表达载体上（分泌表达或者融合表达载体）,测序、酶切验证以后,就可以表达了表达步骤：挑取
当然不一定,比如说你的目的基因的copynumber高或者PCR的效率高都会使得beta-actin的条带不如目的基因的条带亮
一般程序如下：获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测.[主要试剂主要试剂]主要试剂1、LB培养基.2
真核基因是可以在大肠杆菌中表达的.比如现在美国的公司用在大肠杆菌中导入人的胰岛素基因,使其表达,合成胰岛素.原理很简单1.表达载体要有大肠杆菌能够识别的启动子、SD序列就行,就好像是一段大肠杆菌本身的
1,首先需要根据三个目标基因及Actin的序列设计四对引物,引物设计原则同普通PCR引物,网上有很多介绍的,最好其中一个引物是结构基因部分序列+内含子部分序列这种模式.序列长一些25++,退火温度高一
蛋白大小和表达强弱没有密切的关系（当然过大的蛋白质原核表达困难）,要看你的蛋白的来源（原核还是真核来源、是否经过修饰等）.不好表达.表达出来活性也很可能没有.大肠杆菌表达系统缺乏糖基化.
工程菌表达目的基因一般会出现基因排斥现象.如果目的基因忽然受体没有排斥现象的话,在目的基因标过程中可能会出现：蛋白质合成受阻或者氨基酸原料不足现象,动物基因的的表达直至蛋白质的合成需要经过内质网和高尔
1.表达载体要有合适的启动子、SD序列等.2.去掉内含子.一般用cDNA.不过真核生物在大肠杆菌中表达会存在无法对翻译好的蛋白质进行修饰的问题,这样使得这些蛋白质不具有活性
actin一般作为内参使用,意味着它的表达水平在多数细胞中是比较一致的.如果需要比较actin的话,就需要使用其他的内参了,比如GAPDH.具体选择什么基因作为内参,就和你选取的组织有关,最好查阅一下
`````````````````````分给我吧,别浪费了
怎么了,大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌,是Escherich在1885年发现的,在相当长的一段时间内,一直被当作正常肠道菌群的组成部分,在以前认为是非致病菌哦.直到20世纪中期,才认识到
用钙离子处理大肠杆菌,使细胞处于一种容易吸收周围环境中DNA的生理状态（使细胞膜的通透性增加）,这种大肠杆菌成为感受态细胞.
这个只能查文献了,试着到CNKI上检索检索吧.
额,楼上……管家基因确实大部分是所有细胞中都要均一表达的,但重要的在于她的稳定表达,在细胞中的表达数量是较为稳定,浮动较小的.管家基因是相对于奢侈基因所说,它不会由于细胞分化而导致差异表达,在细胞中有
基因工程所用大肠杆菌表达真核基因都是cDNA序列,也就是没有内含子的.最大的困难在于有很多真核基因表达的蛋白翻译后修饰.大肠杆菌内没有特定的分子伴娘,没有磷酸化修饰酶等等,往往造成得到的蛋白没有活性.
用质粒和核糖体表达
1.最大的困难是原核系统没有真核系统特有的翻译后修饰机制,例如糖基化,磷酸化,等等.有时这种修饰对蛋白的活性或者结构非常重要.此时就只有换真核系统了.2.此外大肠杆菌表达系统由于采用强启动子,以及一些
50ug/ml,之前做过的
大肠杆菌是原核生物,人是真核生物,不可能是细胞结构相同；遗传信息也不同,大肠杆菌的遗传物质是RNA,而人是DNA,所以遗传规律也不相同；所有生物共用一套密码子,所以遗传密码相同.